Информация

Когда следует использовать ингибиторы эндоцитоза в анализах связывания клеток?

Когда следует использовать ингибиторы эндоцитоза в анализах связывания клеток?


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Я начинаю проводить тесты на связывание клеток и хочу, чтобы мои белки не подвергались эндоцитозу в моих клетках млекопитающих. Типичные предложения заключаются в том, что клетки следует держать на льду и что эксперимент по связыванию также проводится при охлаждении клеток.

Однако для уверенности было предложено использовать ингибиторы эндоцитоза. Итак, мои вопросы: когда нужны ингибиторы эндоцитоза? Как я узнаю, что необходимы ингибиторы эндоцитоза? Какие из них я бы на самом деле использовал?

Я понимаю, что существуют как клатриновые, так и неклатриновые механизмы интернализации. Какой механизм взаимодействия антитело-рецептор было бы более полезно изучить?


Как и во многих других случаях, это зависит от обстоятельств. Кроме того, мне не совсем понятно, когда вы говорите о взаимодействии антитело-рецептор, вы имеете в виду, что у вас есть антитело, специфичное для рецептора, или что вы изучаете связывание рецепторов Fc с антителами? (в дальнейшем я предполагаю первое)

Для большинства типов клеток и большинства молекул клеточной поверхности простое связывание антител не вызывает эндоцитоза, и держать клетки на льду достаточно для предотвращения большей части фонового эндоцитоза (я бы также проводил анализы в холодной комнате, чтобы даже когда вы вынимаете трубочки из ведра для льда, они остаются холодными).

С другой стороны, если вы используете высокофагоцитарные клетки (например, макрофаги) и / или запускаете рецептор посредством перекрестного связывания или какого-либо другого механизма, вы можете получить некоторый эндоцитоз, который повлияет на ваши результаты.

Механизм (клатрин или не) также может варьироваться, опять же в зависимости от того, что связано.

Вам следует провести некоторую оптимизацию, например: провести тот же анализ на наборе образцов, с ингибированием или без него, и посмотреть, не влияет ли это на связывание ваших антител. Но имейте в виду, что многие препараты для подавления эндоцитоза могут делать и другие вещи, поэтому остерегайтесь артефактов. Возможно, прочтите это: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18369934


Смотреть видео: SpectraSensors TDLAS Gas Analyzer: Best-in-Class Moisture Analyzer (December 2022).